Məhsullar

5-fluorourasil (5-FU) və iki endogen monofosfat nukleotidin bir neçə metabolitinin kəmiyyətini xüsusi olaraq təyin etmək üçün biz maye xromatoqrafiya-tandem kütlə spektrometriyasına (LC-MS/MS) əsaslanan orijinal metod hazırladıq.Bu analiz aşağıdakıları təyin etməyə imkan verdi: (i) 5-FU və ya 5-fluoro-2'-deoksiuridindən (5-FdUrd) 5-fluoro-2′-deoksiuridin-5′-monofosfatın (5-FdUMP) hüceyrədaxili istehsalı , (ii) 5-FdUMP konsentrasiyasının hüceyrədaxili 2′-deoksiuridin-5′-monofosfat (dUMP)/timidin-5′-monofosfat (TMP) nisbətinə təsiri və (iii) 5-FdUMP-nin ifraz dərəcəsi və ABC daşıyıcıları ilə insan mədəni hüceyrələrindən 5-FU.Təcrübə şərtlərimizdə hüceyrələr 5-FU və ya 5-FUrd ilə inkubasiya edilmişdir.Sonra hüceyrə zülalları metanolla çökdürüldü.Bu prosedur yüksək hasilat bərpasını təmin etdi.Bundan əlavə, hüceyrələrdən 5-FU və 5-FdUMP ifrazını ölçmək üçün mədəniyyət mühitində bu molekulların miqdarını təyin etdik.Media ya birbaşa enjekte edildi (5-FU) və ya Oasis Wax çıxarma kartuşundan (5-FdUMP) istifadə edərək bərk fazalı ekstraksiyadan keçdi.Analitlərin ayrılması dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) sütununda mobil faza kimi ammonium format tamponu/metanol/su (5/5/90, v/v) istifadə edərək izokratik rejimdə aparılmışdır.İş vaxtı 6,2 dəqiqədən çox olmadı.Analitlər mənfi ion rejimində elektrosprey interfeysində ionlaşdırılmışdır.Biz metodu birləşmələrə uyğun olaraq 2,5-150 ng mL -1 diapazonunda təsdiq etdik.Təhlildaxili və inter-təhlil dəyişkənliyi yeddi gün ərzində 10%-dən aşağı olmuşdur.Nümunələr -20 °C-də ən azı iki həftə saxlandıqda və üç dondurma-ərimə dövründən sonra bütün birləşmələr hüceyrələrdə və ya mədəniyyət mühitində sabit idi.Hər iki mühitdə matris effekti müşahidə edilməmişdir.