Məhsullar

Antranilik turşu ilə törəmə və flüoresan aşkarlamaya əsaslanan qlikosiltransferazalar üçün yeni yüksək performanslı maye xromatoqrafiya analizi.

Təhlillər yüksək effektiv maye ilə həm β1-4 qalaktosiltransferaza (GalT-1) və həm də α2-6 sialiltransferazanın (ST-6) fəaliyyətlərinin ölçülməsi üçün 2-aminobenzoy turşusunun (2AA; antranilik turşu, AA) unikal etiket kimyasından istifadə etməklə hazırlanmışdır. Flüoresan aşkarlama ilə xromatoqrafiya (HPLC) (Anumula KR. 2006. Qlikoprotein karbohidratlarının yüksək performanslı maye xromatoqrafik analizi üçün flüoresan törəmə üsullarında irəliləyişlər. Anal Biochem. 350:1-23).N-Asetilqlükozamin (GlcNAc) və N-asetillaktozamin qəbuledici kimi, uridin difosfat (UDP)-qalaktoza və sitidin monofosfat (CMP)-N-asetilneuramin turşusu (NANA) isə müvafiq olaraq GalT-1 və ST-6 üçün donor kimi istifadə edilmişdir.Enzimatik məhsullar yerində AA ilə etiketləndi və normal faza şəraitindən istifadə edərək TSKgel Amide 80 sütununda substratlardan ayrıldı.Ferment vahidləri eyni vaxtda törəmə Gal-β1-4GlcNAc və NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc standartları ilə müqayisə edilərək pik ərazilərdən müəyyən edilmişdir.Təhlillər üçün xəttilik (vaxt və ferment konsentrasiyası), dəqiqlik (intra- və interassay) və təkrar istehsal qabiliyyəti müəyyən edilmişdir.Təhlillərin təcrid və təmizlənmə zamanı ferment fəaliyyətlərinin monitorinqində faydalı olduğu aşkar edilmişdir.Təhlillər yüksək həssaslığa malik idi və ənənəvi radioaktiv şəkər əsaslı ölçmələrə bərabər və ya onlardan daha yaxşı aparılmışdır.Təhlil formatı, həmçinin karbohidrat qəbuledicilərində etiketləmə üçün azaldıcı uc olması şərti ilə digər transferazaların fəaliyyətinin ölçülməsi üçün istifadə edilə bilər.IgG istifadə edərək qlikoprotein qəbulediciləri üçün bir analiz hazırlanmışdır.IgG qlikanlarının (iki antennalı G0, G1, G2, mono- və disialilləşdirilmiş) ayrılması üçün qısa bir HPLC profilləşdirmə metodu hazırlanmışdır ki, bu da GalT-1 və ST-6 aktivliklərinin sürətli şəkildə müəyyən edilməsini asanlaşdırır.Bundan əlavə, bu profilləşdirmə metodu klinik şəraitdə IgG qlikanlarında dəyişiklikləri izləmək üçün faydalı olmalıdır.